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  • 详细分析转染试剂的应用以及使用效果
  • 点击次数:169 发布时间:2019-08-22
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  •    转染试剂是一种新结构类型的DNA转染试剂。该转染试剂为阳离子聚合物和脂质体的杂合体,具有转染效率高、重复性好、毒性低和稳定性极强的特点,目前该转染试剂为我公司产品。转染试剂用于哺乳动物细胞的转染,如肿瘤细胞系(常见的细胞有HEK293,CHO,COS-1,COS-7,Hela,NIH3T3等)和原代培养的细胞以及昆虫细胞sf9,sf21等。转染试剂,1.0ml,可用于24孔板转染333次或者6孔板166次转染操作。
     
      转染试剂由纳米高分子聚合物组成,分子内含有许多氨基,在生理PH下会发生质子化,这些质子化的氨基可以中和DNA质粒表面的负电荷,使DNA分子由伸展结构压缩为体积相对较小的DNA粒子,并包裹在其中,使DNA免受核酸酶的降解。转染复合物主要是通过细胞内吞作用将DNA转移进入细胞,形成内含体,DNA从内含体释放,进入细胞质中,再进一步进入核内转录、表达。通过纳米技术生产出的转染试剂在纳米尺度表现出结合保护DNA能力强、毒性低的独特性能。
     
      转染试剂的应用:
      将DNA导入哺乳动物细胞和昆虫细胞。
      同病毒协同转染难转哺乳动物细胞,可显著增强病毒的转染效率。
     
      转染试剂的使用及效果:
      将2μg无内毒素质粒DNA和4μL本产品分别稀释到50μL溶液A中,将上述两溶液混匀,加入到在1mL培养基中生长了18-24小时、覆盖率达到50-80%的培养细胞中,轻摇以混匀,然后在37℃/5%CO2孵箱中培养,24-72小时后根据实验需要进行瞬时表达分析或稳定细胞系加压筛选。
      转染试剂主要用于哺乳动物细胞和昆虫细胞的瞬时转染以及稳定细胞系构建,可以将转染实验操作缩短到一分钟即可完成。本产品具有下列特点:
      1、本产品和质粒混合后无需室温静置孵育,直接转染。
      2、毒性低,转染后细胞存活率高。
      3、适合于多种常用的细胞系。
      4、可直接加入含血清的细胞培养基中进行转染,而且无需在转染后补加血清和更换超快转染试剂盒培养基。
      5、如果实验目的在于筛选抗药性稳定细胞系,可以在细胞传代后可直接进行转染实验,不需转染前细胞培养时间。
      6、无需在转然后4-6小时补加血清或更换培养基。
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