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  • 影响胶原酶Q32853消化组织的因素
  • 点击次数:272 发布时间:2019-05-23
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  •   胶原酶Q32853是分解天然胶原蛋白的酶,由多种微生物和许多不同的动物细胞制造。有效的胶原酶是由厌氧细菌——溶组织梭菌分泌的“粗”胶原酶。由MacLennan,Mandl和Howes于1953年首先提出的发酵和纯化过程首先被Sigma-Aldrich采用,并终被改进用于生产更高活性的产品。“粗”胶原酶是指该物质实际上是一种混合物,除胶原酶之外还有几种不同的酶,它们共同作用以分解组织。目前已知存在胶原酶的两种形式。除了少数例外,目前不同的商业胶原酶全部由溶组织梭菌制造,或者是克隆自溶组织梭菌基因的大肠杆菌表达的重组形式。
     
      胶原酶Q32853按其存在的方式不同可分为人体内源性胶原酶和药用胶原酶两种。人体内源性胶原酶是指人体内部本身所具有的胶原酶,如牙龈、触膜等上皮组织和关节滑膜、椎间盘内都不同程度的存在着这种胶原酶,它在体内胶原蛋白的分解过程中发挥着不可或缺的作用。药用胶原酶是指利用生物制药的高科技手段从溶组织梭状芽孢杆菌的发酵液中提取、纯化并精制而得的白色或类白色无菌冻干粉针生物制剂。
     

      胶原酶Q32853的类型:
     
      1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺,脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细 胞,用于哺乳动细胞的分离。
     
      2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。
     
      3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分,分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离,将结缔组织分离成单个细胞。
     
      4、胶原酶Ⅱ适用于肝脏,骨,甲状腺,心脏和唾液腺组织。
     
      影响胶原酶Q32853消化组织的因素:
     
      基于我们自己的研发和与客户讨论的结果,显然,特定组织的解离和制备方式对胶原酶消化-解离速度和效率都有显著影响。组织供体年龄差异也可能是随时间变化的主要原因。请确保消化缓冲液中钙离子浓度为5 mM。螯合剂EGTA和EDTA可去除钙离子,从而严重抑制胶原酶活性。β-巯基乙醇16、半胱氨酸16和8-羟基喹啉-5-磺酸盐16也是胶原酶抑制物。一些较高特异性和活性的胶原酶能够确定浓度下导致过量细胞死亡。这种情况下,可减少胶原酶用量和/或添加0.5%的BSA或5-10%的血清,以稳定细胞来进一步消化。
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