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  • 改善后的组织细胞固定液具有的可溶性有以下几点
  • 点击次数:724 发布时间:2019-03-19
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  •   组织细胞固定液是目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定液分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等,较为常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
     
      多聚甲醛溶液(1% PFA)主要由多聚甲醛、磷酸盐、去离子水组成,该固定液适合于绝大多数组织和细胞的固定,是免疫组织化学和培养细胞的固定液之一,它能较好的保护组织和细胞的形态结构以及核酸。
     
      组织细胞固定液的改善可溶性:
     
      1、改变N端或C端:酸性肽(pH值为7时带负电荷)我们提议;N端乙酰化C端保持自由羧基,以增加负电荷。碱性肽(pH值为7时带正电荷)C端氨基化N段自由氨基,以增加正电荷。
     
      2、缩短或加长序列:某些序列含有大量疏水氨基酸,如Trp、Phe、Val、Ile、Leu、Met、Tyr、Ala等当这些疏水残基大于50%通常难溶解。为增加肽的极性,加长序列可能会有帮助。另外一种选择是通过减少疏水残基的方法降低肽链的长度以增加极性。肽链极性越高,就越有可能溶于水。
     
      3、加入可溶性残基:对于一些极性氨基酸能改善可溶性。酸性肽可在N端或C端加上Glu-Glu.碱性肽可在N端或 C端加上Lys-Lys.若不能加入带电荷集团。可以将Ser-Gly-Zer加到N端或C端。但是,当肽链的两端不能改变时,此方法不行。
     
      4、通过置换一个或多个残基改变序列:肽链的可溶性可通过改变序列某些残基来改善,一般对单个残基的替换就能显著改变其疏水性。而这种改变是较为保守的,如用Gly替换Ala。
     
      5、选用不同“框架”来改变序列。
     
      组织细胞固定液的样品要求:
     
      1、待标记样品需保证90%以上的纯度,样品中不含有干扰标记物结合的成分,如有特殊成分,请提前标注说明。
     
      2、待标记样品蕞小标记量为1mg,是干粉,如果是液体,浓度应大于1mg/ml。
     
      3、抗体IgG样品中应不含BSA、叠氮钠、甘氨酸等成分。
     
      4、大分子蛋白应提供分子量、等电点、缓冲液成分及pH等信息;小分子多肽需提供氨基酸序列;小分子化合物还需提供分子结构式。
     
      5、请提前说明任何特殊情况。
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