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  • 使用lip3000脂质体3000试剂,您可以获得以下五点
  • 点击次数:52 发布时间:2019-12-26
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  •    lip3000脂质体3000是一种人工膜。在水中磷脂分子亲水头部插入水中,脂质体疏水尾部伸向空气,搅动后形成双层脂分子的球形脂质体,直径25~1000nm不等。脂质体可用于转基因,或制备的药物,利用脂质体可以和细胞膜融合的特点,将药物送入细胞内部生物学定义:当两性分子如磷脂和鞘脂分散于水相时,分子的疏水尾部倾向于聚集在一起,避开水相,而亲水头部暴露在水相,形成具有双分子层结构的的封闭囊泡,称为脂质体。药剂学定义脂质体(liposome):系指将药物包封于类脂质双分子层内而形成的微型泡囊体。
     
      使用试剂,您可以获得:
      1、在多种细胞系中具有极高地转染效率和较高水平地重组蛋白表达。
      2、传输siRNA的优异性能。
      3、在有血清存在的情况下可保证转染效力——转染后无需更换培养基。
      4、保证可以用于高通量应用的试剂。
      5、用于建立稳定细胞系的可靠试剂lip3000脂质体3000试剂为大多数细胞提供了zui高的转染效率和活性。当存在血清或用于进行蛋白表达的细胞系(如COS-7,CHO和293)时,lip3000脂质体3000尤为有效,效率可超过90%。
     
      注意事项:
      要求细胞铺板密度较高,以90%-95%为佳,这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响。可用于有血清培养基的转染,并且转染前后不需要换培养基,使得操作方便了许多,但是要注意制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂,因为血清会影响复合物的形成。
      复合物形成后是可以加入血清。这里要特别注意检测所用的无血清培养基是否能和lip3000脂质体3000匹配,比如已知CD293,SFMII,VP-SFM就不行。此外还应该留意,如果研究的基因要求比较长的表达时间,比如细胞周期相关基因,或者时细胞表面蛋白,zui好选择细胞铺板密较低的转染试剂,不适合用lip3000脂质体3000。
      对于大多数阳离子脂质体试剂,应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到zui大的转染效率。DNA和转染试剂的比例,通常推荐是1:2或者1:3,优化可以从0.5-5之间慢慢试。使用小剂量确定的优化条件可以用于进行大剂量的转染,只要根据培养板表面比例线性增加铺板细胞的数目、阳离子脂质体试剂和DNA量就可以了。
      还有转染的时候培养基中不能添加抗生素。抗生素,比如青霉素和链霉素,一般对于真核细胞无毒,但阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性,使抗生素可以进入细胞。这降低了细胞的活性,导致转染效率低。所以,在转染培养基中不能使用抗生素,甚至在准备转染前进行细胞铺板时也要避免使用抗生素。这样,在转染前就不必润洗细胞。对于稳定转染,不要在选择性培养基中使用青霉素和链霉素,因为这些抗生素是GENETICIN选择性抗生素的竞争性抑制剂。另外,为了保证无血清培养基中细胞的健康生长,使用比含血清培养基更少的抗生素量。
      阳离子脂质体应该在4度保存,要注意避免多次反复长时间开盖,因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。当然还有要注意质粒的质量,质粒的内毒素是转染的大敌。
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