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  • 博莱霉素在实验时一定要注意这些要点
  • 点击次数:114 发布时间:2019-10-26
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  •    博莱霉素与铁的复合物嵌入DNA,引起DNA单链和双链断裂。不引起RNA链断裂。作用的第1步是本品的二噻唑环嵌入DNA的G-C碱基对之间,同时末端三肽氨基酸的正电荷和DNA磷酸基作用,使其解链。作用的第二步是本品与铁的复合物导致超氧或羟自由基的生成,引起DNA链断裂。口服无效,需经肌内或静脉注射。
     
      博莱霉素的特点是:
      1、非冻保存提取RNA用的新鲜组织,在37℃下可保存1天,25℃下可保存1周,4℃下可保存1月,在-20℃或-80℃下可长期保存。其间样品可反复冻融十多次。
      2、应用范围广,可用于保存,邮寄和运输病毒、细菌、果蝇、植物组织、动物组织、培养细胞、悬浮细胞(白细胞、流式细胞仪收集的细胞)等。
      3、兼容性广,RNALOCKER保存的样品可以直接用于RNA提取也可直接用于组织切片、免疫学和流式细胞分析。
      4、结果准确,本产品进入细胞后能迅速锁定RNA水平,使实验结果更能准确反映取样时基因表达谱的真实状态。
     
      博莱霉素的实验要点:
      1、CTAB溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
      2、在适条件下,DNA—CTAB沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA.—CTAB沉淀。
      3、饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用苯酚和L仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(苯酚—L仿—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。细菌的培养和收集将含有质粒pBS的DH5α菌种接种在LB固体培养基(含50μg/mlAmp)中,37℃培养12-24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5mlLB液体培养基(含50μg/mlAmp)中,37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。非冻型组织RNA保存液小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
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