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  • 用这个方法来操作转染试剂,工作效率更高哦!
  • 点击次数:446 发布时间:2019-08-13
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  •    转染试剂是一种多聚阳离子聚合物,具有较高的阳离子电荷密度使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵”(protonsponge)体。这种聚阳离子能将各种报告基因转入各种种属细胞,其效果好于脂质聚酰胺,经进一步的改性后,其转染性能好于树枝状聚合物,而且它的细胞毒性低。
     
      转染试剂操作步骤:
      所列步骤适用于24孔板培养的哺乳动物细胞,其他培养材料,请参考表1按照转染规模调整,所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA(μg)与VigeneFection(μg)的比值为1:3或1:4,转染状态良好的细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。
      1、贴壁细胞:转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500μl培养基中,在转染时细胞可长至90-95%融合;悬浮细胞:在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500μl培养基中。
      2、转染液制备,每孔细胞用量如下:
      A、用50μlDMEM培养基稀释质粒DNA,轻轻混匀。
      B、取适量VigeneFection在50μlDMEM培养基中稀释,室温孵育5min。
      C、将前两步所稀释的DNA和VigeneFection混合,轻轻混匀,室温放置30min。
      3、在每孔细胞中加入混合后的转染液,轻轻摇匀。
      4、贴壁细胞可在转染4-6h后可更换培养基,悬浮细胞可在转染后的18-48h之间,对细胞进行换液。转染18-48h之后可检测基因表达。如果检测到蛋白表达,请在转染后24-72h收集培养液。
      5、对于稳定转染,在转染24h后以1:10传代培养,第二天可加入选择培养基。
     
      转染试剂注意事项:
      推荐在混合前使用Opti-MEM(Cat.No.267485)或DMEM细胞培养基(Cat.No.SH30022.01B)稀释VigeneFection和核酸。
      转染过程中勿向培养基中添加抗生素,以免造成细胞死亡。
      不同批次实验请保持细胞接种条件相同。
      转染前细胞的状态好坏对终的转染效果高低影响很大,请务必保证转染前,细胞处于良好的生长状态。
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