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  • 详细分析组织细胞固定液的使用方法及注意事项
  • 点击次数:519 发布时间:2019-05-17
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  •   组织细胞固定液的作用:
      组织经一系列的处理后,就必须进行固定,当然有的组织是先固定,再进行处理,然后再固定。固定的作用,从组织学的角度其简单的定义是,保持细胞、组织的固有形态和结构,使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构,而从免疫组化技术的角度,固定的作用不仅是使细胞内蛋白质凝固,尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应;防止细胞的自溶,以免使抗原扩散至组织间质;以保持组织的固有形态和结构;更重要的是保持组织或细胞的抗原性,不但要使抗原不导致失活,而且不使抗原发生弥散的现象,才能在免疫组化染色时,不产生过深的背景,影响对阳性物的判断。
     
      组织细胞固定液的使用说明:
      1、对于细胞样品,去除培养液后,按照每六孔板一个孔加入 1 毫升固定液的比例,加入 4%多聚甲醛固定液。对于细胞涂片等其它细胞样品,加入固定液的量以充分盖住样品为准。通常室温固定 10-20 分钟即可,但固定较长时间,例如 1-2 小时也是可以的。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。
      2、对组织切片,加入 4%多聚甲醛固定液量以充分覆盖切片为准,或使用染色架进行固定。通常室温固定 10-20 分钟即可完成固定,但切片较厚时可以固定较长时间,例如 1-2 小时。后续需使用适当的洗涤液充分洗涤以去除残留的多聚甲醛。
      3、对于组织块样品,浸泡入 4%多聚甲醛固定液中,室温或 4℃浸泡固定 2-24 小时。建议不超过 8 小时,除非组织块特别大,难以渗透。固定完成后,放入装有蒸馏水的离心管中清洗,每 15-30 分钟换一次,共 6-8 次,建议在摇床进行,或用流水冲洗 1-2 小时。随后梯度脱水,进行包埋。如果暂时不包埋可放入 70-75%的酒精中保存。
     

      组织细胞固定液的注意事项:
      1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
      2、多聚甲醛虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
      3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 完全掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%多聚甲醛固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
      4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
      5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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